Postoji mnogo načina za mjerenje rasta bakterija, a jedan je način složeniji od drugog. Iako se ponekad dosljednost mjerenja mora zanemariti, najjednostavniji način je dovoljan da se točno izmjeri rast bakterija pa se često koristi. Najčešće korištene metode su praćenje i brojanje bakterija, mjerenje suhe ili vlažne mase te mjerenje zamućenosti/zamućenosti. Laboratorij vaše škole trebao bi imati alate i opremu potrebnu za izvođenje barem jednog od ovih pokusa.
Korak
Metoda 1 od 3: Praćenje bakterija uživo
Korak 1. Pripremite sastojke
Mnogo je posebnih alata koje je potrebno pripremiti, a koji možda nisu dostupni u biološkom laboratoriju. Prije izvođenja pokusa pripremite svu opremu i spremnike kako ne bi došlo do problema tijekom procesa. Morat ćete odmah znati svaki sastojak koji se koristi i osnovne uvjete ovog eksperimenta.
- Pripremite komoru za brojanje. Ima ugrađenu komoru, staklo za mikroskop i mikroskop pa ga je lako postaviti i koristiti. Možete ga kupiti u laboratoriju ili u školskoj trgovini. Ovaj alat trebao bi imati upute koje će vas voditi kroz cijeli proces.
- Pripremite šalicu za razlijevanje ili razmazanu šalicu. Oba ova spremnika omogućuju vam praćenje bakterija iznutra.
- Kultura je izraz koji se koristi za opisivanje rasta organizama u pokusu.
- Juha je tekući medij u kojem kultura raste.
Korak 2. Upotrijebite metodu izlijevanja ili širenja ploče
Također možete staviti bakterije izravno na posudu za pregled pomoću mikroskopa. Kulturu izlijte na tanjurić i stavite pod mikroskop. Pratite broj prisutnih bakterijskih stanica.
Korak 3. Provjerite je li koncentracijska doza ispravna
Ako ih ima previše, bakterije će se nakupiti jedna na drugu i možda ćete pogriješiti. Razrijedite kulturu miješanjem u više juhe. Ako ih je premalo, rezultati izračuna neće biti točni. Procijedite juhu pomoću sustava za filtriranje.
Korak 4. Brojanje bakterija
Posljednji korak je brojanje bakterija jednu po jednu. Pogledajte kroz povećalo u komori za brojanje i zapišite broj bakterija koje vidite. Usporedite rezultate s rezultatima drugih ispitivanja.
Metoda 2 od 3: Mjerenje suhe i vlažne mase
Korak 1. Provjerite imate li odgovarajuću opremu
Ova metoda koristi skupu opremu i puno vremena. Ako vaš laboratorij nema potrebnu opremu, dobro je upotrijebiti drugu metodu. Međutim, ako je vaš laboratorij dovoljno dobro opremljen, preporučujemo ovu metodu jer daje dosljednije rezultate. U ovoj metodi trebat će vam:
- Hidraulička gravitacijska pećnica
- Spremnik za vaganje od aluminija
- Set tikvica (laboratorijske boce)
- Centrifugalni stroj (centrifuga) ili laboratorijski sustav za filtriranje
Korak 2. Provjerite je li kultura u tikvici
Bundevi dodajte kulturu. U ovoj fazi kultura bi trebala biti juha, iako će se kasnije ponovno odvojiti.
Korak 3. Osušite aluminijski spremnik za vaganje u laboratorijskoj pećnici
Umjesto toga, možete koristiti membranu od filtra celuloznog acetata promjera 47 mm i veličine pora 0,45 μm. Koji god spremnik za vaganje upotrijebili, odmjerite ga jer će ga kasnije trebati oduzeti pri vaganju bakterijskih stanica.
Korak 4. Kulturu miješajte u tikvici dok se ne ujednači
Ćelija će prirodno potonuti zbog gravitacije i morat će se miješati kako bi se ravnomjerno rasporedila po tikvici. Na taj način možete imati više uzoraka.
Korak 5. Centrifugom odvojite bakterijske stanice od juhe
Ovaj alat rotira tikvicu i brzo se uravnotežuje tako da ispušta juhu i ostavlja kulturu u tikvici.
Korak 6. Ostružite pastu s bundeve i stavite je u posudu za vaganje
Izbacite juhu jer vam više ne treba. Međutim, nemojte se još uvijek riješiti bundeve jer će se i dalje koristiti.
Korak 7. Isperite centrifugalni stroj i ulijte vodu za ispiranje u spremnik
Ispustite vodu za ispiranje u tikvicu na bakterijske stanice kako biste dobili mokru masu.
Korak 8. Pronađite suhu težinu
Za mjerenje suhe težine, posudu stavite u pećnicu i sušite na 100 ° C 6-24 sata prema uputama iz pećnice i/ili posude za vaganje. Pazite da temperatura ne bude previsoka kako bakterije ne bi izgorjele. Kad završite, izvažite bakterije i ne zaboravite smanjiti rezultat za težinu spremnika za vaganje.
Metoda 3 od 3: Mjerenje zamućenosti
Korak 1. Pripremite potrebnu opremu
Trebat će vam izvor svjetlosti i spektrofotometar. Obje se mogu nabaviti u trgovinama laboratorijskih potrepština. Spektrofotometar bi trebao imati upute koje će vas voditi u korištenju instrumenta prema modelu koji imate. Cijena spektrofotometra je prilično pristupačna i laka za upotrebu pa bi mogla postati jedna od najčešće korištenih metoda za mjerenje rasta bakterija.
Korak 2. Osvijetlite uzorak
Prema Laymanovom izrazu, zamućenost je razina zamućenosti uzorka. Morate dobiti broj mjerenja zamućenosti, koji se mjeri u NTU (Nephelometric Turbidity Unit). Ovaj alat treba kalibrirati prije nego što može točno izmjeriti uzorak.
Korak 3. Zapišite rezultate
Na zamućenost utječe broj bakterija u uzorku. Spektrofotometar će vam također reći postotak prijenosa (%T). Ova će se brojka povećati ako se zamućenost smanji. Usporedite rezultate s rezultatima drugih testova za mjerenje rasta bakterija.
Upozorenje
- Budući da imate posla s kolonijom bakterija, poduzmite mjere opreza noseći sigurnosnu opremu poput zaštitnih naočala i rukavica. Također je dobra ideja nositi masku, pogotovo ako ne znate vrstu bakterije koja se proučava.
- Prije rukovanja bilo kojom vrstom bakterije, čak i bezopasnom, poduzmite mjere opreza. Prije početka provjerite jesu li sve otvorene rane na tijelu potpuno prekrivene.
