U kemiji razrjeđivanje je postupak smanjenja koncentracije tvari u otopini. Lančano razrjeđivanje je ponavljano razrjeđivanje otopine za brzo povećanje faktora razrjeđenja. Ovaj se postupak obično izvodi u pokusima koji zahtijevaju vrlo razrijeđene otopine s velikom točnošću. Na primjer pokusi koji uključuju krivulje koncentracije na logaritamskoj ljestvici ili pokusi za određivanje gustoće bakterija. Lančana razrjeđenja naširoko se koriste u znanstvenim eksperimentima kao što su biokemija, mikrobiologija, farmakologija i fizika.
Korak
Metoda 1 od 2: Izvođenje osnovnog razrjeđivanja
Korak 1. Odredite odgovarajuću otopinu razrjeđivača
Vrlo je važno odrediti tekućinu koja će se koristiti za razrjeđivanje. Mnoge su otopine topljive u destiliranoj vodi, ali to nije uvijek tako. Ako razrjeđujete bakterije ili druge stanice, učinite to na podlozi za uzgoj. Tekućina koju odaberete koristit će se za sva razrjeđenja lanca.
Ako ste u nedoumici o tome koji razrjeđivač koristiti, potražite pomoć ili potražite na internetu. Potražite primjere drugih koji su radili slična razrjeđenja lanca
Korak 2. Pripremite brojne epruvete koje sadrže 9 mL otapala
Epruvete se koriste za prazna razrjeđenja. Prvo stavite nerazrijeđeni uzorak u prvu epruvetu, a zatim razrijedite uzastopno u sljedeće epruvete.
- Označite sve epruvete koje ste koristili prije početka razrjeđivanja kako se ne biste zbunili nakon što je eksperiment pokrenut.
- Svaka epruveta bit će napunjena s 10 razrjeđenja, počevši od epruvete čija tvar nije razrijeđena. Razrjeđenje u prvoj epruveti je 1:10, zatim 1: 100 u drugoj epruveti, 1: 1000 u trećoj itd. Odredite količinu razrjeđivanja koja se mora izvršiti unaprijed kako ne biste rasipali otopinu razrjeđivača.
Korak 3. Pripremite epruvetu koja sadrži najmanje 2 mL nerazrijeđene otopine
Minimalna količina otopine koju treba razrijediti potrebna za izvođenje ovog razrjeđivanja lanca je 1 mL. Ako koristite samo 1 ml, neće ostati preostala nerazrijeđena otopina. Označite BLM za nerazrijeđene otopine.
Prije početka razrjeđivanja temeljito promiješajte otopinu
Korak 4. Izvedite prvo razrjeđivanje
Uzmite pipetom 1 mL nerazrijeđene otopine iz BLM epruvete i stavite je u epruvetu s oznakom 1:10 koja sadrži 9 mL razrjeđivača, a zatim dobro promiješajte. Sada postoji 1 mL nerazrijeđene otopine u 9 mL razrjeđivača. Dakle, otopina je razrijeđena faktorom razrjeđenja 10.
Korak 5. Izvedite drugo razrjeđivanje
Za drugo razrjeđivanje, uzmite 1 mL otopine iz epruvete 1:10, zatim je stavite u epruvetu 1: 100 koja također sadrži 9 mL razrjeđivača. Prije dodavanja u sljedeću epruvetu, provjerite je li otopina u cijevi 1:10 potpuno promiješana. Ponovno provjerite je li razrjeđenje u epruveti 1: 100 potpuno pomiješano. Otopina iz epruvete 1:10 razrijeđena je 10 puta u epruveti 1: 100.
Korak 6. Nastavite ovaj postupak za izvođenje dužih razrjeđivanja
Ovaj se postupak može ponoviti onoliko puta koliko je potrebno da se dobije željena koncentracija otopine. U pokusima koji koriste krivulje koncentracije, možete izvesti razrjeđivanje lanca kako biste proizveli brojne otopine s razrjeđenjima 1, 1:10, 1: 100, 1: 1.000.
Metoda 2 od 2: Izračun faktora razrjeđenja i konačne koncentracije
Korak 1. Izračunajte omjer posljednjeg razrjeđenja u lančanom razrjeđenju
Ukupni omjer razrjeđivanja može se odrediti množenjem faktora razrjeđenja od svakog koraka do posljednjeg. Matematička ilustracija je s formulom Dt = D1 x D2 x D3 x… x D , Dt je ukupni faktor razrjeđenja i D je omjer razrjeđivača.
- Na primjer, recimo da napravite razrjeđivanje 1:10 4 puta. Uključite faktor razrjeđivača u formulu: Dt = 10 x 10 x 10 x 10 = 10.000
- Faktor razrjeđivača u četvrtoj epruveti u ovom razrjeđivanju lanca je 1: 10.000. Koncentracija tvari nakon razrjeđivanja 10.000 je puta niža nego prije razrjeđivanja.
Korak 2. Odredite koncentraciju otopine nakon razrjeđivanja
Da biste odredili konačnu koncentraciju otopine nakon razrjeđivanja lanca, morate znati njezinu početnu koncentraciju. Formula je Ckraj = Cpočetak/D, Ckraj je konačna koncentracija razrijeđene otopine, Cpočetak je početna koncentracija izvorne otopine, a D je unaprijed određeni omjer razrjeđenja.
- Na primjer: Ako počnete s staničnom otopinom čija je koncentracija 1.000.000 stanica po ml, a omjer razrjeđenja 1.000, koja je konačna koncentracija razrijeđenog uzorka?
-
Koristeći formulu:
- Ckraj = Cpočetak/D
- Ckraj = 1.000.000/1.000
- Ckraj = 1000 stanica po ml.
Korak 3. Provjerite jesu li sve jedinice iste
Prilikom izvođenja bilo kojeg izračuna, provjerite jesu li jedinice uvijek iste na kraju izračuna. Ako je početna jedinica stanica po mL, provjerite jesu li jedinice ostale iste na kraju izračuna. Ako je početna koncentracija dijelovi na milijun (bpd), tada konačna koncentracija također mora biti u jedinicama bpj.
